注
分析之间存在依赖关系,某些分析的输入是上步分析的输出,依赖关系会有提示分析过程会有运算量较大的部分,用时较长,请您耐心等待。
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单样本分析
质控与过滤:选择一个样本,通过细胞和基因的过滤指标,对基因和细胞数目进行过滤。原始数据一般为cellranger鉴定的细胞集。
选择高变异基因:对数据进行标准化、中心化,选择高变异基因用于下游分群。
PCA线性降维:通过PCA分析,选取高变异维度用于下游分析。
细胞分群:对细胞进行tSNE或umap分群。
细胞群类型:使用SingleR和已有的数据库鉴定细胞类型。
调整细胞群类型:已鉴定出的细胞群类型,根据差异基因可能有所调整,此功能可以更改鉴定的细胞类群名称。
差异基因:鉴定不同细胞类型间差异基因,可选择“细胞分群”、“细胞群类型”、“调整细胞群类型”这三个功能对应的细胞群名称。
细胞亚群相关性:鉴定“细胞分群”中不同细胞亚群间的相关关系。
细胞周期分析:根据细胞周期相关基因,对细胞打分,鉴定细胞的周期性。
多样本联合分析
质控与过滤:选择不少于两个样本,通过细胞和基因的过滤指标,对基因和细胞数目进行过滤。原始数据一般为cellranger鉴定的细胞集。
选择高变异基因:对数据进行标准化、中心化,选择高变异基因用于下游分群。
PCA线性降维:通过PCA分析,选取高变异纬度用于下游分析。
细胞分群:对细胞进行tSNE或umap分群。
细胞分群:对细胞进行tSNE或umap分群。
细胞群类型:使用SingleR和已有的数据库鉴定细胞类型。
样本间保守的标记基因:样本的不同细胞类群进行差异分群,找出不同样本间共有的差异基因,用于判定细胞类型。
调整细胞群类型:已鉴定出的细胞群类型,根据差异基因可能有所调整,此功能可以更改鉴定的细胞类群名称。
差异基因:鉴定不同样本不同细胞类型间差异基因。
基因表达谱可视化:对基因的表达情况进行可视化。
细胞亚群相关性:鉴定“细胞分群”中不同细胞亚群间的相关关系。
细胞周期分析:根据细胞周期相关基因,对细胞打分,鉴定细胞的周期性。
多样本时序分析
选择数据:选择“单样本分析”或“多样本联合分析”已分群的数据,进行细胞轨迹分群。
时序性分析:根据细胞中基因的表达水平,鉴定细胞时序性性轨迹,并通过自定义的根节点,绘制时序性分布图。
拟时轨迹差异基因:按细胞时序性,计算差异基因,并绘制基因分布图。
细胞亚群
细胞亚群
细胞类型
基因在样本和群集间的表达
细胞类型定义
各分群内目标基因表达情况比较
细胞群间的差异基因
细胞亚群
细胞亚群
参考文献:
Picelli, Simone et al., Smart-seq2 for sensitive full-length transcriptome profiling in single cells, Nature Publishing Group, 2013.Hashimshony, Tamar et al., CEL-Seq: single-cell RNA-Seq by multiplexed linear amplification, Elsevier, 2012.
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Macosko, Evan Z, Anindita Basu, Rahul Satija, James Nemesh, Karthik Shekhar, Melissa Goldman, Itay Tirosh, et al. 2015. “Highly Parallel Genome-Wide ex pression Profiling of Individual Cells Using Nanoliter Droplets.” Cell 161 (5): 1202–14.
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