分析之间存在依赖关系,某些分析的输入是上步分析的输出,依赖关系会有提示
分析过程会有运算量较大的部分,用时较长,请您耐心等待。
此版本最近更新,如遇问题,请随时与我们联系。

单样本分析


质控与过滤:选择一个样本,通过细胞和基因的过滤指标,对基因和细胞数目进行过滤。原始数据一般为cellranger鉴定的细胞集。


选择高变异基因:对数据进行标准化、中心化,选择高变异基因用于下游分群。


PCA线性降维:通过PCA分析,选取高变异维度用于下游分析。


细胞分群:对细胞进行tSNE或umap分群。


细胞群类型:使用SingleR和已有的数据库鉴定细胞类型。


调整细胞群类型:已鉴定出的细胞群类型,根据差异基因可能有所调整,此功能可以更改鉴定的细胞类群名称。


差异基因:鉴定不同细胞类型间差异基因,可选择“细胞分群”、“细胞群类型”、“调整细胞群类型”这三个功能对应的细胞群名称。


细胞亚群相关性:鉴定“细胞分群”中不同细胞亚群间的相关关系。


细胞周期分析:根据细胞周期相关基因,对细胞打分,鉴定细胞的周期性。

多样本联合分析


质控与过滤:选择不少于两个样本,通过细胞和基因的过滤指标,对基因和细胞数目进行过滤。原始数据一般为cellranger鉴定的细胞集。


选择高变异基因:对数据进行标准化、中心化,选择高变异基因用于下游分群。


PCA线性降维:通过PCA分析,选取高变异纬度用于下游分析。


细胞分群:对细胞进行tSNE或umap分群。


细胞分群:对细胞进行tSNE或umap分群。


细胞群类型:使用SingleR和已有的数据库鉴定细胞类型。


样本间保守的标记基因:样本的不同细胞类群进行差异分群,找出不同样本间共有的差异基因,用于判定细胞类型。


调整细胞群类型:已鉴定出的细胞群类型,根据差异基因可能有所调整,此功能可以更改鉴定的细胞类群名称。


差异基因:鉴定不同样本不同细胞类型间差异基因。

基因表达谱可视化:对基因的表达情况进行可视化。


细胞亚群相关性:鉴定“细胞分群”中不同细胞亚群间的相关关系。


细胞周期分析:根据细胞周期相关基因,对细胞打分,鉴定细胞的周期性。


多样本时序分析


选择数据:选择“单样本分析”或“多样本联合分析”已分群的数据,进行细胞轨迹分群。


时序性分析:根据细胞中基因的表达水平,鉴定细胞时序性性轨迹,并通过自定义的根节点,绘制时序性分布图。


拟时轨迹差异基因:按细胞时序性,计算差异基因,并绘制基因分布图。

读取样本


过滤基因


过滤细胞

下载表格

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输入颜色


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过滤前后基因数与细胞数

原始数据分布情况

nFeature:细胞中大于0的基因个数、nCount:所有基因的表达量之和、precent-mt:线粒体基因表达量、percent_ribo:核糖体基因表达量、percent_hb:血小板基因表达量、percent_plat:血小板基因表达量、percent.other:上传基因表达量

过滤数据分布情况

均一化与标准化,并选择高变基因用于下游分群

下载表格

图示美化

输入颜色


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高异质性基因列表

高异质性基因图示

选择代表整个数据集的主成分数量,进行下游分析


图示美化

PCA结果可视化
两个主成分聚类
探索异质性来源

输入颜色


下载PCA结果图片 下载异质性来源图片
n为10,代表选择前10个产生差异的PC

PCA结果

异质性来源

每个基因对每个PC轴的贡献度(loading值)

细胞非线性降维聚类

下载数据

细分细胞亚群


选择查看的数据类型


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输入颜色

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聚类图示

查看细胞亚群

数据查看

自动注释细胞群

下载数据

选择查看的数据类型


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聚类图示

数据查看

将marker与细胞类型对应(仅人和小鼠)

上传数据包含一列,每行是一个基因

下载数据
下载图片

基因对应细胞类型列表

重新命名细胞类型

挑选marker标记细胞群

使用一对多的方法,得到某个集群与另一组集群间的差异表达基因

差异检验的方法

对差异表达结果进行筛选

为每个集群选择前n个高表达基因

按LogFoldChange排序,选择高表达的前n个基因


差异表达基因图示


下载数据 下载图片

细胞群间差异表达基因

差异表达基因图示

细胞亚群


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细胞亚群

细胞周期

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细胞亚群

若保存过整合数据,可直接进行PCA分析

选择样本

过滤参数用英文逗号分隔,顺序与样本顺序一致;过滤后细胞和基因数越多,意味着后期运算速度越慢

过滤基因


过滤细胞

下载表格

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输入颜色



下载图示

过滤前后基因数与细胞数

原始数据分布情况

nFeature:细胞中大于0的基因个数、nCount:所有基因的表达量之和、precent-mt:线粒体基因表达量、percent_ribo:核糖体基因表达量、percent_hb:血小板基因表达量、percent_plat:血小板基因表达量、percent.other:上传基因表达量

过滤数据分布情况

选择细胞间高变异基因

选择高异质性基因进行下游分析

下载表格

图示美化

输入颜色


下载图片

多个样本数据整合


添加样本信息

下载填写示例 补充信息非必选,请按需求添加。可有一个或多个分类方式,单个分类中未提到的样本,会归入Other组。 上传列表共三列:分类方式、样本名、样本对应分组。没有表头,分隔符为Tab 填写说明:示例按两种方式分类,第一种分类按组织tissue,分为skin、bone,另一种分类按处理方式condition,分为treat、control。注意,填写应使用平台给出的样本名。

高异质性基因列表

高异质性基因图示

多个样本数据合并

添加的样本信息

添加后数据框示例

选择代表整个数据集的主成分数量,进行下游分析

FromPrevious是上一步骤合并后的数据,其他选项是以往保存的数据

图示美化

PCA结果可视化
两个主成分聚类
探索异质性来源

输入颜色

下载PCA结果图片 下载异质性来源图片
n为10,代表选择前10个主成分(PC)用于后续的聚类分析

PCA结果

异质性来源

每个基因对每个PC轴的贡献度(loading值)

细胞非线性降维聚类

下载数据

细分细胞亚群


选择查看的数据类型


图示美化

输入颜色

下载图片

聚类图示

查看细胞亚群

数据查看

自动注释细胞群

下载数据

选择查看的数据类型


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输入颜色

下载图片

聚类图示

数据查看

鉴定样本间保守的Marker


下载表格

输入颜色

下载图片

cluster n在样本之间的共有marker基因

基因在群集间的分布

细胞类型


基因在样本和群集间的表达

细胞类型定义

各分群内目标基因表达情况比较

多样本细胞群间差异基因鉴定

样本A是pct.1,样本B是pct.2。比较方式A:B,例如FC是2,那么代表A为2,B为1 下载表格

细胞群间的差异基因

可视化基因表达变化

下载分布图 下载小提琴图 下载表格

分布图

小提琴图

基因水平

细胞亚群


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输入颜色

下载图片

细胞亚群

细胞周期

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输入颜色

下载图片

细胞亚群

选择细胞分群

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输入颜色

下载图示

时序分析聚类图

root细胞是指细胞轨迹中的起始点,请选择一定范围的细胞作为root细胞


下载细胞轨迹 下载细胞时序

细胞轨迹

细胞按拟时排序

基因差异分析


图示美化


下载差异基因列表 下载基因变化图示

差异基因列表

基因的变化

根据客户建议:细胞周期性分析、细胞群间系统发育分析、细胞亚群鉴定、数据库自动注释细胞类型等多个小功能即将上线,敬请期待!



平台上可以分析已有的数据吗?

可以,需要提供基因表达矩阵,请与我们联系。

部分图片没有下载按钮,如何进行下载?

平台中部分图片使用的是动态图示,右上角有下载图标,请将鼠标移至图片右上角。

此平台部分功能运行速度有些慢。

部分分析运行速度较慢,大概一分钟,这与R包本身运行速度有关。

此平台可否并行,也就是多个客户同时登陆一个账号?

不可以,每位客户都只有一个线程运行程序。

参考文献:

Picelli, Simone et al., Smart-seq2 for sensitive full-length transcriptome profiling in single cells, Nature Publishing Group, 2013.
Hashimshony, Tamar et al., CEL-Seq: single-cell RNA-Seq by multiplexed linear amplification, Elsevier, 2012.
Hashimshony, Tamar et al., CEL-Seq2: sensitive highly-multiplexed single-cell RNA-Seq, BioMed Central, 2016.” Bioinformatics 25:765–71.
Macosko, Evan Z et al., Highly parallel genome-wide expression profiling of individual cells using nanoliter droplets, Elsevier, 2015.
Butler, Andrew et al., Integrating single-cell transcriptomic data across different conditions, technologies, and species, Nature Publishing Group, 2018.” Bioinformatics 26:139–40.
Trapnell, Cole et al., The dynamics and regulators of cell fate decisions are revealed by pseudotemporal ordering of single cells, Nature Publishing Group, 2014.
Tang, Fuchou, Catalin Barbacioru, Yangzhou Wang, Ellen Nordman, Clarence Lee, Nanlan Xu, Xiaohui Wang, et al. 2009. “mRNA-Seq Whole-Transc riptome Analysis of a Single Cell.” Nat. Methods 6 (5): 377–82.
Picelli, Simone, Åsa K Björklund, Omid R Faridani, Sven Sagasser, Gösta Winberg, and Rickard Sandberg. 2013. “Smart-Seq2 for Sensitive Full-Length Transc riptome Profiling in Single Cells.” Nat. Methods 10 (11): 1096–8.
Hashimshony, Tamar, Florian Wagner, Noa Sher, and Itai Yanai. 2012. “CEL-Seq: Single-Cell RNA-Seq by Multiplexed Linear Amplification.” Cell Rep. 2 (3): 666–73.
Macosko, Evan Z, Anindita Basu, Rahul Satija, James Nemesh, Karthik Shekhar, Melissa Goldman, Itay Tirosh, et al. 2015. “Highly Parallel Genome-Wide ex pression Profiling of Individual Cells Using Nanoliter Droplets.” Cell 161 (5): 1202–14.
Stegle, Oliver, Sarah A Teichmann, and John C Marioni. 2015. “Computational and Analytical Challenges in Single-Cell Transc riptomics.” Nat. Rev. Genet. 16 (3): 133–45.
Jiang, Lichun, Felix Schlesinger, Carrie A Davis, Yu Zhang, Renhua Li, Marc Salit, Thomas R Gingeras, and Brian Oliver. 2011. “Synthetic Spike-in Standards for RNA-seq Experiments.” Genome Res. 21 (9): 1543–51.
Kivioja, Teemu, Anna Vähärautio, Kasper Karlsson, Martin Bonke, Martin Enge, Sten Linnarsson, and Jussi Taipale. 2012. “Counting Absolute Numbers of Molecules Using Unique Molecular Identifiers.” Nat. Methods 9 (1): 72–74.

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